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酸溶血定性检测试剂盒是利用PNH红细胞对补体敏感性增高，在酸化的血清中经过37℃孵育，易溶血，血清经过56℃加热30min，使补体灭活，病人红细胞不溶解，该试剂盒主要用于检测动物血液的红细胞膜的缺陷，尤其用于鉴定阵发性睡眠性血红蛋白尿症。

• 所用器具必须洁净干燥，以免溶血造成假阴性。
  
• 血清酸化后应注意密闭保存，尽快检测，避免CO₂逸出导致血清酸度降低，影响溶血程度。
  
• 如果患者多次输血，其血液中的不正常细胞会相应减少，可呈弱阳性或阴性。出现这种情况应延长孵育时间至4～6h，再观察溶血情况。
  
• 该实验可作为PNH的过筛实验，阴性可排除PNH，阳性应做酸化溶血实验证实。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 制备脱纤维血清：取患者和与患者同血型的正常人静脉血5mL，慢慢注入含有3个洁净玻璃珠的小容器中，立即轻轻的持续摇动，直至纤维蛋白出现并附着于玻璃珠上为止(一般需要10～15min)。转移脱纤维血至洁净离心管，低速离心，取上清待用，即为脱纤维血清。
  
• 制备50%红细胞悬液：取脱纤维血清，经生理盐水洗涤3次，每次都应颠倒、混匀、离心，尽量吸弃上清液，留下红细胞沉淀，加入等体积PNH NaCl Buffer重新悬浮红细胞，即为50%红细胞悬液。
  
• 取试管6支，按下表先加入同血型正常人新鲜血清0.5mL，其中3、6两支试管在56℃水浴30min，使补体灭活，其余4管置于室温30min。此后按下表顺序操作。
  

  加入物(ml)	待测管			对照管
  试管号	1	2	3	4	5	6
  正常人新鲜血清	0.5	0.5	—	0.5	0.5	—
  正常人56℃灭活血清	—	—	0.5	—	—	0.5
  Acidic Buffer	—	0.05	0.05	—	0.05	0.05
  50%患者红细胞悬液	0.05	0.05	0.05	—	—	—
  50%正常人红细胞悬液	—	—	—	0.05	0.05	0.05
  混匀，置于37℃水浴中1h(30min时轻轻混匀一次)，离心。
  阳性结果(溶血)	±	3+	—	—	—	—

• 如果PNH患者第3管(加正常人灭活血清管)溶血，则说明此溶血不依赖于补体，故不是PNH，可能是红细胞有其他缺陷(如球形红细胞增多症)，应做进一步鉴别。